编码基因过表达(Over-Expression,OE)库基因研究中常需要通过上调靶基因的表达来观察表型变化。过表达(Over-Expression,OE)是上调基因表达最常用的方法,其基本原理是将目的基因的编码区(coding sequence,CDS)构建到质粒或病毒载体中,导入细胞内使基因的表达量增加。根据用途,载体主要分为克隆载体、原核表达载体、真核表达载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体等。
过表达如何选择合适的载体呢?
首先我们需要考虑这几个方面:
1.工具载体的表达时间与实验观察时间是否相符;
2.工具载体可以容纳的片段大小与目的基因大小是否契合;
3.工具载体对目的细胞、在体组织的转导是否足够高效。
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质粒 | 慢病毒 | 腺病毒 | 腺相关病毒 |
外源基因表达时间 |
24h开始表达 持续3-7天 |
2-4天开始表达 长时间稳定表达 |
1-2天开始表达 持续7-14天 |
7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 |
插入片段大小 | < 5-8kb | < 4kb | < 5-8kb |
<2.8kb (包括必须的启动 子以及荧光或者标签元件) |
稳定细胞株筛选 | 可以,但较难操作 |
可以,外源基因整合于 主基因组,筛选简单 |
不可以,瞬时表达外源 基因传代后效果减弱 |
不可以 |
细胞实验 |
细胞系,部分细胞 转染效率较低 |
首选, 广谱,感染效率高 |
广谱,感染效率高, 适合原代非增殖细胞感染 |
不适合细胞实验 |
动物实验 | 不适合 |
适合, 根据观察时间 和注射部位选择 |
较适合(免疫原性高), 根据观察时间和注射部位选择 |
首选, 根据观察时间和注射部位选择 |
滴度 | 无 | 最高可达109TU/ml | 高达1012pfu/ml | 高达1012-13v.g/ml |
其次,我们需要了解载体中的每一个元件代表什么。实际应用中,可根据实验目的来挑选合适的载体元件。下面是载体图谱上常见元件介绍:如启动子、荧光标签、抗性、多克隆酶切位点MCS等。
吉凯提供过表达质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒AAV等产品。
类别 | 产品名称 | 简介 | 产品规格 |
质粒 | cDNA克隆(现货) | 提供无错义、插入、缺失、颠倒、移码突变的CDS模版序列 | 10ug |
过表达质粒 |
用于过表达编码基因/IncRNA |
10ug (含等量对照) | |
慢病毒 | 过表达慢病毒(现货) | 用于过表达编码基因/IncRNA |
5E+7TU/1E+8TU (含等量对照) |
过表达慢病毒 | 用于过表达编码基因/IncRNA | 1E+8TU (含等量对照) | |
过表达慢病毒(Tet-on ) | Tet on诱导过表达慢病毒 | 1E+8TU (含等量对照) | |
腺病毒 | 过表达腺病毒(现货) | 用于过表达编码基因/IncRNA | 2E+10PFU (含等量对照) |
过表达腺病毒 | 用于过表达编码基因/IncRNA | 2E+10PFU(含等量对照) | |
腺相关病毒 | 工具腺相关病毒(现货) |
光遗传、化学遗传、钙指示剂、 荧光示踪、重组酶等108种现货AAV |
1E+12v.g.-1E+13v.g |
过表达腺相关病毒 | 用于过表达编码基因/IncRNA | 1E+12v.g (含等量对照) |
吉凯提供用于过表达编码基因和非编码基因的质粒、慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等多种载体。点击查看载体图谱>>
产品类别 | 载体编号 | 元件顺序 |
质粒过表达 | GV609 | MCS-firefly_ Luciferase |
GV608 | MCS-firely_ Luciferase | |
GV486 | CMV-left circular frame-MCS-right circular frame-EF1a-copGFP-SV40-Neomycin | |
GV485 | CMV-left circular frame-MCS-right circular frame- SV40-neomycin | |
GV272 | SV40-firefly_ Luciferase-MCS | |
GV238 | MCS-firefly_ Luciferase | |
GV230 | CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin | |
慢病毒过表达 | GV365 | Ubi-MCS-3FLAG-CMV-EGFP |
GV320 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-Cherry | |
GV341 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin | |
GV358 | Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin | |
GV492 | Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES -puromycin | |
慢病毒过表达Tet-on | GV308 | TetlP-MCS-3FLAG-Ubi-TetR-IRES-Puromycin |
腺病毒过表达 | GV345 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-Cherry |
GV314 | CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP | |
腺相关病毒过表达 | GV388 | CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA |
GV389 | CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA | |
GV410 | CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP | |
GV411 | CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA | |
GV461 | CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA | |
GV467 | CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA | |
GV489 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | |
GV466 | hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA | |
GV475 | hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA | |
GV488 | gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA |
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