免疫组库(immune repertoire,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。TCR/BCR是T/B淋巴细胞表面的特征性标志物,作用是识别抗原,基本单位都是由C/V/D/J四个基因簇编码;细胞发育过程中存在复杂的V(D)J重排机制,导致TCR/BCR基因序列多样性极其丰富,这些序列多样性的集合称为免疫组库。
传统的免疫组库研究技术通常是用多重PCR技术或5’RACE扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR3区),再结合高通量测序技术实现,但往往只能检测TCR和BCR一条链的序列信息。BD Rhapsody VDJ全长捕获平台,不仅可以或得全长重链/轻链配对的BCR序列,以及α/β链或者γ/δ链配对的TCR序列,不仅包含了多样性最高CDR3区域,更是覆盖了完整的FR1-4区域以及CDR1-3区域,可以从分析结果中轻松获取V/D/J片段的完整序列以及基因注释信息。
研究目的: 利用单细胞RNA测序探索胃癌异质性在免疫微环境中的体现
样本信息:临床胃癌患者的手术切除样本(分选肿瘤组织以及癌旁组织内浸润的CD45+细胞)
测序策略:BD Rhapsody平台,scRNA-seq+scTCR&BCR-seq +CyTOF
研究结论: 相较于癌旁组织,胃癌组织内浸润了更多的耗竭性CD8+T(CD8-Tex)细胞以及免疫抑制的调节性T(Treg)细胞。在GSRCC中,CD4+和CD8+T细胞克隆的扩增情况均显著弱于non-GSRCC,并且GSRCC中的TCR共享也显著减少,B细胞向IgG型浆细胞的分化能力有所减弱。GSRCC中的免疫“静默”状态主要由T、B细胞克隆扩增受抑、细胞分化/转化受阻导致。
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