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BD Rhapsody单细胞免疫组测序

产品简介

免疫组库(immune repertoire,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。TCR/BCR是T/B淋巴细胞表面的特征性标志物,作用是识别抗原,基本单位都是由C/V/D/J四个基因簇编码;细胞发育过程中存在复杂的V(D)J重排机制,导致TCR/BCR基因序列多样性极其丰富,这些序列多样性的集合称为免疫组库。




传统的免疫组库研究技术通常是用多重PCR技术或5’RACE扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR3区),再结合高通量测序技术实现,但往往只能检测TCR和BCR一条链的序列信息。BD Rhapsody VDJ全长捕获平台,不仅可以或得全长重链/轻链配对的BCR序列,以及α/β链或者γ/δ链配对的TCR序列,不仅包含了多样性最高CDR3区域,更是覆盖了完整的FR1-4区域以及CDR1-3区域,可以从分析结果中轻松获取V/D/J片段的完整序列以及基因注释信息。



技术优势

通量高:8通道型号的芯片,一次可以实现8个样本同时上机检测,每个通道最高可以上机细胞数40000个;

信息全面:可以同时获得单个细胞的mRNA信息和TCR/BCR信息;

可检测罕见细胞类型:不仅可以分析常见的α/β T细胞,还可以分析罕见的γ和δ T细胞。

单细胞TCR/BCR解决的问题

1、揭示克隆性、多样性、抗原特异性和细胞环境;

2、组装并注释全长V(D)J基因序列;

3、从单个T细胞识别α和β链序列,并可匹配TCR/BCR双链;

4、可以将TCR/BDR与对应的细胞内的转录组信息进行合并分析。

应用方向

1、免疫组库可以捕捉肿瘤发生时免疫微环境的变化,寻找免疫治疗的靶点,从而辅助免疫治疗更好的抗击肿瘤;

2、器官或者骨髓移植时,经常会诱发宿主排斥反应的发生,从而发生慢性移植抗宿主病,研究其中的免疫发生过程;

3、自身免疫免疫性疾病中免疫细胞的作用;

4、免疫组库在感染性疾病、抗体开发、用药及疫苗评估等多个方面均有应用价值;例如通过免疫组库研究,可以检测感染类疾病过程中的免疫动态变化;

5、在抗体开发方面,可以获得特征性的BCR(Ig)序列,缩短抗体开发的流程;

6、针对某种疾病用药后的外周血样本进行评估,确认药物是否激发免疫反应及其功效。

经典案例




研究目的: 利用单细胞RNA测序探索胃癌异质性在免疫微环境中的体现

样本信息:临床胃癌患者的手术切除样本(分选肿瘤组织以及癌旁组织内浸润的CD45+细胞)

测序策略:BD Rhapsody平台,scRNA-seq+scTCR&BCR-seq +CyTOF

捕获细胞数:>53,768个细胞

研究结论: 相较于癌旁组织,胃癌组织内浸润了更多的耗竭性CD8+T(CD8-Tex)细胞以及免疫抑制的调节性T(Treg)细胞。在GSRCC中,CD4+和CD8+T细胞克隆的扩增情况均显著弱于non-GSRCC,并且GSRCC中的TCR共享也显著减少,B细胞向IgG型浆细胞的分化能力有所减弱。GSRCC中的免疫“静默”状态主要由T、B细胞克隆扩增受抑、细胞分化/转化受阻导致。


送样建议


单细胞TCR/BCR免疫组库测序

细胞样本

≥5x105个细胞,细胞冻存液程序降温冻存(可复苏),-80℃保存,干冰运输

组织样本

新鲜组织:200-400mg,0.5x0.5x0.5cm,2-3块,新鲜组织放置于5倍体积的组织保护液中,冷链运输

血液样本

全血样本3-5ml,EDTA抗凝,4℃保存,冷链运输,或者直接分离PBMC细胞冻存,-80℃保存,干冰运输

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