N7-甲基鸟苷(m7G)是一种最常见的RNA表观修饰，常位于真核生物mRNA的5’帽和内部位置，或所有物种的rRNA和tRNA内部。mRNA的5'帽子结构中的甲基化修饰是真核生物mRNA中最常见的修饰方式。m7G帽子结构能结合翻译起始因子EIF4F，促进mRNA翻译， 而且还能防止mRNA被细胞内的核酸外切酶降解。m7G修饰通过影响各种RNA分子的代谢，包括mRNA、tRNA、microRNA和核糖体RNA。 越来越多的证据表明，m7G在人类疾病的发展中发挥着关键作用。METTL1-WDR4复合体可将m7G加到tRNA和一部分mRNA内部。目前已有基于抗体和化学方法的m7G检测技术（m7G-MeRIP-Seq和m7G miCLIPSeq）。得益于这些技术，mRNA内部的m7G被认为与翻译相关。
GO（Gene ontology）是国际通用的基因功能分类体系，按照基因的细胞成分（cellular component）、分子功能（molecule function）以及生物过程 （biological process）分为3类。进行GO富集能够看到样本在这三大类中的基因分布情况，也可以用于对目标功能的基因的聚集。通过计算数据集的超几何分布，得出基因富集对应GO terms的排序。
随着科学研究的发展，科学家们发现不同的基因间存在着相互作用关系。这些基因相互协调，发挥其生物学功能，展现出生物学现象。针对这一现象，科学家们分门别类的制定出各种pathway。较为著名的有KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）数据库。
样本量
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m7G RNA甲基化修饰测序 |
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RNA |
总量≥300μg，浓度≥150ng/μl，纯度OD260/280在1.8-2.2之间，OD260/230≥2，RIN值≥7.5，28s:18s≥1（Qubit检测浓度，不是NanoDrop的浓度检测） |
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细胞样本 |
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组织样本 |
采样建议
一、贴壁细胞
1. 取出贴壁生长细胞，显微镜下观察细胞，确定生长状态良好;
2. 加入3ml的1×PBS(RNase-free 水配制)悬起细胞沉淀，300g离心5min，弃 PBS, 洗 2 次;
3. 加入适量裂解液反复吹打至裂解充分; 参考用量:1mL TRIzol 裂解 106 细胞，最多107细胞；
4. 为确保实验的顺利，建议样品备份2~3 份;
5. 转移至尖底离心管中，-80°C长期保存或通过干冰运输寄出。
二、悬浮细胞
1. 选取生长状态良好的细胞悬液;
2. 200g离心5min，得到细胞沉淀弃培养基;
3. 加入3ml的1×PBS(RNase-free 水配制)悬起细胞沉淀，200g 离心 5min，弃 PBS，洗 2 次;
4. 加入适量细胞裂解液反复吹打至裂解充分;参考用量:1mL Trizol 裂解 106 细胞，最多107细胞；
5. 为确保实验的顺利，建议样品备份2~3 份;
6. 转移至尖底离心管中，-80°C长期保存 或通过干冰运输寄出。
三、组织样本
1. 选取新鲜的动物组织，取材后用RNase-free 配制的生理盐水/PBS 进行漂洗，去除血渍和污物，并剔除结缔组织等非研究组织;
2. 在冰上将样品分割成50mg 左右的小块，以防止样品降解，然后放置于细胞冻存管或 1.5ml EP 管中;
3. 所有动物组织样品取材后立即用液氮速冻≥1h，然后转移至-80°C冰箱中保存;
4. 为确保实验的顺利，建议样品备份2~3 份;
5. 然后将组织样品置于密封性好的塑料袋中，用胶布缠到冰袋上，并在泡沫盒中装入足量的干冰进行运输。
注意事项:
1. 细胞必须裂解充分后再寄送，勿将干冻的细胞直接寄送，因为细胞冷冻的过程中冰晶很容易刺破细胞，此时破碎的细胞会释放内源性RNAse,从而降解 RNA；
2. 细胞裂解是否充分很关键，细胞裂解充分的标志:细胞与裂解液的混合物形成清亮不粘稠的液体，且没有细胞团块残留，如果细胞样品始 终粘度很大，说明该细胞样品仍未裂解充分，此时应继续补加裂解 液，以 100ul 为梯度进行补加，直到样品完全裂解充分；
3. 细胞样品勿用胰酶消化，胰酶会消化细胞膜上的膜蛋白，导致细胞破裂，破裂的细胞会释放RNase 导致 RNA 降解。
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