组内差异大主要表现组内老鼠有的就长不出来肿瘤，有的长得很大。一种很小的可能是接种悬液未摇匀；第二种可能是个体差异：老鼠年龄是一个很大的因素，建议控制好试验条件，动物周龄在5-6左右，体重均一，健康状态一致。

这种情况其实还是没有成瘤。成瘤过程一般是细胞注射后有圆形小包，然后很快消失，再隆起（一般是组织液），再变小变红（血管生成），最后肿瘤快速生长。因此没有成瘤只是第二阶段，建议调整一下细胞注射量、更换实验鼠或添加一些促进细胞生长的因子试试。

正常一般4周可以达到0.8-1cm肿瘤体积，但是具体成瘤周期需要依据细胞成瘤能力的强弱和细胞接种量。

如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。

按照实验要求选择接种部位，基本是腋下和背部。但接种部位一般不前腋下，这里血管丰富，易成活；接种于皮下，太浅则因血管少而不易成瘤，太深会在肿瘤长大后与周围的肌肉、结缔组织等相粘连，让你不能很好地分清肿瘤与侵犯的组织，特别是不易观察肿瘤的生长情况。

腋窝中部外侧皮下为好。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

因为培养液、血清等可能会导致动物的炎症反应而影响肿瘤的发生发展。

目前裸小鼠是应用最广的皮下成瘤模型。一般取5-6周龄裸鼠饲养(此时大小约16-23g)。雌雄都可以，和性别有关的实验除外。但有些肿瘤在雌性中生长不如雄性的好，比如在肝癌HCC,雌激素会与NF-kB或/和C/EBPbeta等interleukin-6的转录因子直接结合并减弱其活性，从而影响IL-6的转录及其下游诱导(促进)癌进展，从而保护机体。因此目前大多数实验倾向使用雄性裸鼠。

背景很高的原因主要是组织太干，一方面可能是由于在多聚甲醛中浸泡的时间太久，另一方面可能是由于切片后组织晾的太干燥，一些背景可以通过适当的图片的后期处理解决。明亮的亮点可能是PBS没有过滤就用来洗片子，里面有杂质，或者是镜头上面的杂质，有些亮点可能也与组织本身的结构有关。

首先，可能是组织在处理的时候，在多聚甲醛中浸泡的时间过长，或者是组织在处理过程中没有全程在PBS中浸泡，还可能是组织在-80 °C冰箱中贮存的时间太久，这些原因都会使组织变脆，变干，缩小，产生空洞。其次，可能组织没有在切片前复温30 min，组织冻的太硬，会使切片产生碎片。

建议参照解剖图谱，尝试多位点注射。